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基本信息

質粒圖譜和多克隆位點信息

注意：

客戶在我公司選擇構建載體服務項目時，請自行提供母源載體。

如要使用本公司保存的母源載體時，本公司不能保證所有母源載體完全符合客戶預期，也不承擔由此產生的任何責任。

載體描述

      質粒是目前應用最廣泛的Red同源重組質粒，該質粒含有受阿拉伯糖啟動子調控的exo、bet、gam基因，其復制子為低拷貝溫敏型復制子，便于質粒的消除。
與同源重組基因敲除相關的3個酶：
      1、Exo蛋白：Exo蛋白是一種核酸外切酶，單亞基的分子量為24 kD，Exo蛋白的活性形式是一種環狀三聚物分子，中間有一中空的通道，通道的一端可容納雙鏈DNA分子，另一端只可容納單鏈DNA。Exo蛋白可結合在雙鏈DNA的末端，從DNA雙鏈的5’端向3’端降解DNA，使DNA分子形成3’粘性末端。
      2、Beta蛋白：Beta蛋白在Red同源重組中起著決定性作用，具有介導互補單鏈DNA退火的功能，是一種退火蛋白，單亞基的分子量為25.8 kD。在溶液中，Beta蛋白自發地形成環狀結構，緊緊地結合在單鏈DNA的3’突出端，防止DNA被單鏈核酸酶降解，并介導互補單鏈DNA的退火。雙鏈DNA退火完成后，Beta蛋白從DNA雙鏈上解離下來。
      3、Gam蛋白：Gam蛋白為16kD的多肽分子，可與RecBCD核酸外切酶結合，抑制其對外源DNA的降解作用，防止外源DNA進入細胞后被宿主降解。

      pKD46含有溫度敏感型的復制起點oriR101，在３０℃培養時可以正常復制，而高于３７℃時會自動丟失。在pKD46上還含有受araB啟動子調控的exo, bet, gam基因，它們通過Ｌ-阿拉伯糖誘導表達，并攜帶氨芐青霉素抗性基因作為篩選標記

載體序列CATCGATTTATTATGACAACTTGACGGCTACATCATTCACTTTTTCTTCACAACCGGCACGGAACTCGCTCGGGCTGGCCCCGGTGCATTTTTTAAATACCCGCGAGAAATAGAGTTGATCGTCAAAACCAACATTGCGACCGACGGTGGCGATAGGCATCCGGGTGGTGCTCAAAAGCAGCTTCGCCTGGCTGATACGTTGGTCCTCGCGCCAGCTTAAGACGCTAATCCCTAACTGCTGGCGGAAAAGATGTGACAGACGCGACGGCGACAAGCAAACATGCTGTGCGACGCTGGCGATATCAAAATTGCTGTCTGCCAGGTGATCGCTGATGTACTGACAAGCCTCGCGTACCCGATTATCCATCGGTGGATGGAGCGACTCGTTAATCGCTTCCATGCGCCGCAGTAACAATTGCTCAAGCAGATTTATCGCCAGCAGCTCCGAATAGCGCCCTTCCCCTTGCCCGGCGTTAATGATTTGCCCAAACAGGTCGCTGAAATGCGGCTGGTGCGCTTCATCCGGGCGAAAGAACCCCGTATTGGCAAATATTGACGGCCAGTTAAGCCATTCATGCCAGTAGGCGCGCGGACGAAAGTAAACCCACTGGTGATACCATTCGCGAGCCTCCGGATGACGACCGTAGTGATGAATCTCTCCTGGCGGGAACAGCAAAATATCACCCGGTCGGCAAACAAATTCTCGTCCCTGATTTTTCACCACCCCCTGACCGCGAATGGTGAGATTGAGAATATAACCTTTCATTCCCAGCGGTCGGTCGATAAAAAAATCGAGATAACCGTTGGCCTCAATCGGCGTTAAACCCGCCACCAGATGGGCATTAAACGAGTATCCCGGCAGCAGGGGATCATTTTGCGCTTCAGCCATACTTTTCATACTCCCGCCATTCAGAGAAGAAACCAATTGTCCATATTGCATCAGACATTGCCGTCACTGCGTCTTTTACTGGCTCTTCTCGCTAACCAAACCGGTAACCCCGCTTATTAAAAGCATTCTGTAACAAAGCGGGACCAAAGCCATGACAAAAACGCGTAACAAAAGTGTCTATAATCACGGCAGAAAAGTCCACATTGATTATTTGCACGGCGTCACACTTTGCTATGCCATAGCATTTTTATCCATAAGATTAGCGGATCCTACCTGACGCTTTTTATCGCAACTCTCTACTGTTTCTCCATACCCGTTTTTTTGGGAATTCGAGCTCTAAGGAGGTTATAAAAAATGGATATTAATACTGAAACTGAGATCAAGCAAAAGCATTCACTAACCCCCTTTCCTGTTTTCCTAATCAGCCCGGCATTTCGCGGGCGATATTTTCACAGCTATTTCAGGAGTTCAGCCATGAACGCTTATTACATTCAGGATCGTCTTGAGGCTCAGAGCTGGGCGCGTCACTACCAGCAGCTCGCCCGTGAAGAGAAAGAGGCAGAACTGGCAGACGACATGGAAAAAGGCCTGCCCCAGCACCTGTTTGAATCGCTATGCATCGATCATTTGCAACGCCACGGGGCCAGCAAAAAATCCATTACCCGTGCGTTTGATGACGATGTTGAGTTTCAGGAGCGCATGGCAGAACACATCCGGTACATGGTTGAAACCATTGCTCACCACCAGGTTGATATTGATTCAGAGGTATAAAACGAATGAGTACTGCACTCGCAACGCTGGCTGGGAAGCTGGCTGAACGTGTCGGCATGGATTCTGTCGACCCACAGGAACTGATCACCACTCTTCGCCAGACGGCATTTAAAGGTGATGCCAGCGATGCGCAGTTCATCGCATTACTGATCGTTGCCAACCAGTACGGCCTTAATCCGTGGACGAAAGAAATTTACGCCTTTCCTGATAAGCAGAATGGCATCGTTCCGGTGGTGGGCGTTGATGGCTGGTCCCGCATCATCAATGAAAACCAGCAGTTTGATGGCATGGACTTTGAGCAGGACAATGAATCCTGTACATGCCGGATTTACCGCAAGGACCGTAATCATCCGATCTGCGTTACCGAATGGATGGATGAATGCCGCCGCGAACCATTCAAAACTCGCGAAGGCAGAGAAATCACGGGGCCGTGGCAGTCGCATCCCAAACGGATGTTACGTCATAAAGCCATGATTCAGTGTGCCCGTCTGGCCTTCGGATTTGCTGGTATCTATGACAAGGATGAAGCCGAGCGCATTGTCGAAAATACTGCATACACTGCAGAACGTCAGCCGGAACGCGACATCACTCCGGTTAACGATGAAACCATGCAGGAGATTAACACTCTGCTGATCGCCCTGGATAAAACATGGGATGACGACTTATTGCCGCTCTGTTCCCAGATATTTCGCCGCGACATTCGTGCATCGTCAGAACTGACACAGGCCGAAGCAGTAAAAGCTCTTGGATTCCTGAAACAGAAAGCCGCAGAGCAGAAGGTGGCAGCATGACACCGGACATTATCCTGCAGCGTACCGGGATCGATGTGAGAGCTGTCGAACAGGGGGATGATGCGTGGCACAAATTACGGCTCGGCGTCATCACCGCTTCAGAAGTTCACAACGTGATAGCAAAACCCCGCTCCGGAAAGAAGTGGCCTGACATGAAAATGTCCTACTTCCACACCCTGCTTGCTGAGGTTTGCACCGGTGTGGCTCCGGAAGTTAACGCTAAAGCACTGGCCTGGGGAAAACAGTACGAGAACGACGCCAGAACCCTGTTTGAATTCACTTCCGGCGTGAATGTTACTGAATCCCCGATCATCTATCGCGACGAAAGTATGCGTACCGCCTGCTCTCCCGATGGTTTATGCAGTGACGGCAACGGCCTTGAACTGAAATGCCCGTTTACCTCCCGGGATTTCATGAAGTTCCGGCTCGGTGGTTTCGAGGCCATAAAGTCAGCTTACATGGCCCAGGTGCAGTACAGCATGTGGGTGACGCGAAAAAATGCCTGGTACTTTGCCAACTATGACCCGCGTATGAAGCGTGAAGGCCTGCATTATGTCGTGATTGAGCGGGATGAAAAGTACATGGCGAGTTTTGACGAGATCGTGCCGGAGTTCATCGAAAAAATGGACGAGGCACTGGCTGAAATTGGTTTTGTATTTGGGGAGCAATGGCGATGACGCATCCTCACGATAATATCCGGGTAGGCGCAATCACTTTCGTCTACTCCGTTACAAAGCGAGGCTGGGTATTTCCCGGCCTTTCTGTTATCCGAAATCCACTGAAAGCACAGCGGCTGGCTGAGGAGATAAATAATAAACGAGGGGCTGTATGCACAAAGCATCTTCTGTTGAGTTAAGAACGAGTATCGAGATGGCACATAGCCTTGCTCAAATTGGAATCAGGTTTGTGCCAATACCAGTAGAAACAGACGAAGAATCCATGGGTATGGACAGTTTTCCCTTTGATATGTAACGGTGAACAGTTGTTCTACTTTTGTTTGTTAGTCTTGATGCTTCACTGATAGATACAAGAGCCATAAGAACCTCAGATCCTTCCGTATTTAGCCAGTATGTTCTCTAGTGTGGTTCGTTGTTTTTGCGTGAGCCATGAGAACGAACCATTGAGATCATACTTACTTTGCATGTCACTCAAAAATTTTGCCTCAAAACTGGTGAGCTGAATTTTTGCAGTTAAAGCATCGTGTAGTGTTTTTCTTAGTCCGTTACGTAGGTAGGAATCTGATGTAATGGTTGTTGGTATTTTGTCACCATTCATTTTTATCTGGTTGTTCTCAAGTTCGGTTACGAGATCCATTTGTCTATCTAGTTCAACTTGGAAAATCAACGTATCAGTCGGGCGGCCTCGCTTATCAACCACCAATTTCATATTGCTGTAAGTGTTTAAATCTTTACTTATTGGTTTCAAAACCCATTGGTTAAGCCTTTTAAACTCATGGTAGTTATTTTCAAGCATTAACATGAACTTAAATTCATCAAGGCTAATCTCTATATTTGCCTTGTGAGTTTTCTTTTGTGTTAGTTCTTTTAATAACCACTCATAAATCCTCATAGAGTATTTGTTTTCAAAAGACTTAACATGTTCCAGATTATATTTTATGAATTTTTTTAACTGGAAAAGATAAGGCAATATCTCTTCACTAAAAACTAATTCTAATTTTTCGCTTGAGAACTTGGCATAGTTTGTCCACTGGAAAATCTCAAAGCCTTTAACCAAAGGATTCCTGATTTCCACAGTTCTCGTCATCAGCTCTCTGGTTGCTTTAGCTAATACACCATAAGCATTTTCCCTACTGATGTTCATCATCTGAGCGTATTGGTTATAAGTGAACGATACCGTCCGTTCTTTCCTTGTAGGGTTTTCAATCGTGGGGTTGAGTAGTGCCACACAGCATAAAATTAGCTTGGTTTCATGCTCCGTTAAGTCATAGCGACTAATCGCTAGTTCATTTGCTTTGAAAACAACTAATTCAGACATACATCTCAATTGGTCTAGGTGATTTTAATCACTATACCAATTGAGATGGGCTAGTCAATGATAATTACTAGTCCTTTTCCTTTGAGTTGTGGGTATCTGTAAATTCTGCTAGACCTTTGCTGGAAAACTTGTAAATTCTGCTAGACCCTCTGTAAATTCCGCTAGACCTTTGTGTGTTTTTTTTGTTTATATTCAAGTGGTTATAATTTATAGAATAAAGAAAGAATAAAAAAAGATAAAAAGAATAGATCCCAGCCCTGTGTATAACTCACTACTTTAGTCAGTTCCGCAGTATTACAAAAGGATGTCGCAAACGCTGTTTGCTCCTCTACAAAACAGACCTTAAAACCCTAAAGGCTTAAGTAGCACCCTCGCAAGCTCGGTTGCGGCCGCAATCGGGCAAATCGCTGAATATTCCTTTTGTCTCCGACCATCAGGCACCTGAGTCGCTGTCTTTTTCGTGACATTCAGTTCGCTGCGCTCACGGCTCTGGCAGTGAATGGGGGTAAATGGCACTACAGGCGCCTTTTATGGATTCATGCAAGGAAAC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