基因型

F- mcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15?lacX74 recA1 rpsL (StrR) endA1 ?dcm uidA(DMluI)::pir-116?sbcC-sbcD

產品說明

GT115菌株，是專門用來克隆含有發夾結構（Hairpin）或重復序列等DNA二級結構的基因序列的大腸桿菌菌株。大腸桿菌中存在一種SbcCD蛋白復合體，可以識別DNA發夾結構，并將其切除；將sbcC和sbcD兩個基因突變，增強了發夾結構DNA的穩定性。同時在大腸桿菌基因組中引入uidA(DMluI)::pir-116，使GT115可以表達 兀 蛋白，含有R6Kg ori復制子的質粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常復制。該菌株還含有具有核酸酶 (endA)突變、重組酶 (recA)突變，增強了外源DNA的穩定性。GT115感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19檢測轉化效率>2×108 cfu/μg DNA。

操作方法
1. GT115感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手撥打EP管底混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養基(S.O.C.營養豐富，可提高轉化效率)。

4. 37℃，225 rpm復蘇60分鐘。

5. 5000 rpm離心1分鐘收菌，留取100 μl左右上清吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C. 或LB培養基上。

6. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項
1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。混入目的DNA時應輕柔操作。轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

2. 此菌株具有鏈霉素抗性，擁有這種抗性的質粒無法使用。