基因型

Ach5 (rifR) Ti pAL4404 (strepR) Octopine

產品說明

LBA4404菌株為Ach5型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的章魚堿型Ti質粒pAL4404，此質粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pAL4404質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。 pAL4404型Ti質粒含有篩選標簽：strep，賦予LBA4404菌株鏈霉素抗性，適用于菸草、番茄、煙草等植物的轉基因操作。本公司生產的LBA4404化學轉化感受態細胞經特殊工藝制作，pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。

操作方法

1. 取-80℃保存的農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態時插入 冰中。

2.每100 μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA（轉化效率較高，第一次使用前最好做預實驗確定所加質粒的量），用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養基，于28℃振蕩培養2~3小時。

4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天

（當平板只含有50 μg/ml kan 時，28℃培養48 h即可；平板中同時加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 時，需28℃培養60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養72-90 h）。