1 基本說明

DH5α是一種常用于質粒克隆的生物工程菌株，在使用pUC系列質粒載體進行DNA轉化時， 由于載體DNA產生的LacZα多肽和DH5α編碼的lacZ△M15相結合，實現α-互補性，從而顯示β-半乳糖苷酶活性。利用這一特性，可以很容易利用藍白斑篩選鑒別重組體菌株。

本公司生產的DH5α感受態細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。本產品被用于DNA的化學轉化，經pUC19質粒檢測，轉化效率可達到10⁸cfu/ug。

2 基因型

F - φ80lacZΔM1 5 Δ(lacZYA-argF) U1 69 deoR recA1 endA1 hsdR1 7 (r k - , m k + ) phoA supE44 λ - thi-1 gyrA96 relA1

3 儲存及使用環境

本產品應保存在-70℃，不可反復凍融或放置時間過長，否則會降低轉化效率。

進行轉化過程中，請根據相應溫度及無菌條件的要求進行。

操作方法

請按照無菌條件標準進行以下操作：

1. 取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中置于冰浴中。
（一次轉化感受態細胞的建議用量為50μl可以根據實際情況分裝使用，應注意所用DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。以下實驗以100μl感受態細胞為例。）

2. 向感受態細胞懸液中加入目的DNA，100μl的感受態細胞能夠被1ng超螺旋質粒DNA（或者10μl以下的連接產物）所飽和，輕輕旋轉離心管以混勻內容物在冰浴中靜置30分鐘。

3. 將離心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速將管轉移到冰浴中使細胞冷卻2-3分鐘該過程不要搖動離心管。

4. 向每個離心管中加入500μl無菌的LB培養基或者SOC培養基，混勻后置37℃搖床，150rpm振蕩培養45分鐘，目的是使菌體復蘇，并使質粒上相關的抗性標記基因表達。

5. 復蘇的菌體混勻后，吸取100ul均勻涂布于含相應抗生素的LB固體平板上，37℃倒置培養12-16小時。
（涂布用量可根據具體實驗來調整。如轉化的DNA總量較多，可取更少量轉化產物涂布平板。反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300μl轉化產物涂布平板。如果預計的克隆較少可通過離心4000rpm 2分鐘后吸除部分培養液，重新懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可置于4℃保存如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養板。）

注意事項與售后服務

1. 請保證感受態細胞正確儲存在-70℃低溫環境。

2. 請保證轉化操作的無菌環境。

3. 如果問題產生是由于感受態本身質量造成的，我們將免費上門替換。

如果您在感受態使用過程中發現任何問題，或者需要一些突發狀況的的解決方案，您可以隨時聯系我們！