1 基本說明

發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感染大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。C58C1發根農桿菌菌株含有pRiA4b農桿堿型Ri質粒，具有廣泛的宿主范圍（薔薇科，夾竹桃科，豆科，茄科，黃芩，煙草等），同時具有鏈霉素，利福平抗性。本公司生產的C58C1化學轉化感受態細胞經特殊工藝制作，pCAMBIA2301質粒（卡那霉素抗性）檢測，轉化效率>104 cfu/μg DNA。

2 基因型

Agrobacterium rhizogenes (strR,rifR ) pRiA4b (agropine type)

3 儲存及使用環境

本產品應保存在-80℃，不可反復凍融或放置時間過長，否則會降低轉化效率。

進行轉化過程中，請根據相應溫度及無菌條件的要求進行。

4操作方法

1.取-80℃保存的C58C1發根農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態時插入冰中。

2.  每100μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA（轉化效率較高，第一次使用前最好做預實驗確定所加質粒的量），用手快速、劇烈撥打管底混勻或用槍吹吸混勻，依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 冰浴中拿出放室溫，加入700μl 無抗生素的TY液體培養基，于28℃振蕩培養2小時。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 TY平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3 天。

5注意事項

1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。

2. 混勻質粒時應用手指快速撥打管底或用槍吹吸混勻，務必使質粒快速、均勻分散開，與感受態細胞充分接觸。轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量或降低涂板的菌量。

4.  C58C1具有鏈霉素、利福平抗性，不可用于具有鏈霉素抗性或利福平抗性質粒的轉化。